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產品名稱:PRECEDO原代乳腺上皮細胞培養基(Human Mammary Epithelial Cell Medium)
產品說明:PRECEDO原代乳腺上皮細胞培養基(Human Mammary Epithelial Cell Medium)是一種促進人乳腺原代上皮細胞體外生長的培養基。該產品是一種無菌的液體混合系統,含有維持目的細胞生長所必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物以及生長因子等。培養基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養箱中平衡時,pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個合適的營養環境,選擇性地促進體外人乳腺原代上皮細胞的生長和擴增。
產品優勢:
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結果與臨床數據接近
使用說明:
?使用前準備
(1)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。
(2)提前30min從4℃冰箱取出*培養基平衡至室溫,提前從-20℃冰箱取出所需體積的細胞外基質膠冰上融化。
?乳腺原代細胞培養
(1)采用預冷的DMEM/F12培養基將細胞外基質膠(Corning#356231)按1∶ 50比例稀釋,至少提前30min 將稀釋后的基質膠預鋪在培養瓶/板底部表面,并使其*覆蓋底部表面,30~60 min后吸干備用。
(2)將分離并計數后的細胞懸液參考表1中細胞數量接種于培養瓶/板,補加*培養基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后放置于培養箱,37℃、5%CO2條件下進行培養。
(3)原代細胞初次接種后2-3天內勿動(利于細胞貼壁)。
?原代乳腺上皮細胞傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達80~90%時即可傳代。
(2)培養箱中取出細胞,棄去舊培養液,加入適量TrypLE*Express酶(Gibco#12605010)37℃孵育,10~20min后取出,輕拍培養瓶/板側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用含10%胎牛血清的DMEM培養基終止消化,并將細胞轉移至離心管中,室溫,300g,離心5min。
(4)棄上清,以1-2mL*培養基重懸細胞,活細胞計數,將細胞懸液按適合的細胞密度接種于預鋪有基質膠的培養瓶/板底部,預鋪方法同上。
(5) 補加*培養基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置于培養箱,37℃、5%CO2條件下繼續培養。
注意事項:
本產品在使用前需平衡至室溫。
使用產品時應注意無菌操作,避免污染。
本產品中不含血清,含有抗生素,如無特別需要,不用額外添加血清和其他抗生素,可直接使用。
為保持本產品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
請于保質期內使用本產品,超出保質期后,將無法達到理想的使用效果。
樣本若為腫瘤樣本,建議使用術中樣本,且腫瘤細胞比例越高(至少>50%),培養成功率越高,不推薦用于少量樣本(如穿刺或者循環腫瘤細胞)的培養。
本產品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。